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引物退火是聚合酶链式反应(PCR)中的关键环节。退火不理想会大幅降低PCR扩增产量和扩增特异性。如果无法设计出具有相似解链温度(Tm)的引物,在选定的退火温度下,Tm较高的引物可能会与非预期的靶标结合,而Tm较低的引物则难以与模板结合,从而可能导致PCR扩增失败。要解决此问题,需要对各个引物对的退火温度进行优化,但这是一个漫长而乏味的过程。为了减少PCR优化,赛默飞开发出了一种含共稳定组分的PCR缓冲液,可增强退火过程中引物-模板复合物的稳定性。将该缓冲液与PCR酶配合使用,即便引物对的解链温度不同,均可以在60°C下成功进行扩增。另一个优点是,使用这种创新型缓冲液,引物-模板复合物的稳定性更强,可以使用同一PCR延伸时间来扩增长度不同的扩增子。通常情况下,延伸时间过长会引起非特异性扩增,然而,使用新一代PCR酶,即便在长延伸时间下,该稳定成分也有助于实现PCR的扩增特异性。这种通用型退火缓冲液经开发用于Invitrogen